Микробиологическое исследование
Микробиологическое исследование является трудоемким, но наиболее чувствительным для диагностики хламидийной инфекции методом; длительность его в среднем составляет 4-7 дней. Несоблюдение техники взятия биологического материала, условий транспортировки и культивирования может приводить к получению ложноотрицательных результатов.
Выделение возбудителя на культуре клеток, обработанных различными метаболитами, является одним из лучших методов диагностики урогенитального хламидиоза («золотой стандарт»). Для исследования можно использовать различные культуры: Hela L-929, культуру 21 из клеток почек хомячков, куриные эмбрионы, однако, по мнению большинства авторов, лучшей является культура клеток МакКоя, обработанных циклогексимидом для блокирования их деления. При использовании метода Романовского-Гимзы элементарные тельца хламидий окрашиваются в розовый цвет, а ретикулярные - в синий. В люминесцентном микроскопе они имеют ярко-зеленую окраску на красно-коричневом фоне клеток. Выделение возбудителя этим методом указывает на то, что он живой, а это очень важно для контроля лечения и определения чувствительности к антибиотикам.
Достоинства метода
Высокая чувствительность (для диагностики достаточно обнаружения одной клетки с цитоплазматическими включениями) и почти 100%-я специфичность.
Недостатки и ограничения:
- Метод требует специального оснащения и соответствующей квалификации персонала.
- Условием получения достоверного результата является полное освобождение материала от сопутствующей бактериальной флоры, предупреждение гибели хламидий при транспортировке, прекращение приема антибиотиков за месяц до исследования.
- Высокая стоимость, длительность и трудоемкость метода.
Показания для диагностики хламидийной инфекции культуральным методом:
- Беременность с отягощенным акушерским анамнезом.
- Оценка эффективности антибактериального лечения.
- Определение чувствительности к антибактериальным препаратам.
- Выявление хламидий у ВИЧ-инфицированных и лиц со вторичными иммунодефицитными состояниями.
- Бесплодие неясного генеза.
- Установление этиологии хронического инфекционного процесса урогенитального тракта.
Цитологический метод
Традиционным методом является исследование мазков, окрашенных по Романовскому-Гимзе или раствором Люголя. Материалом служат мазки, соскобы со слизистой оболочки уретры, цервикального канала (хламидий могут размножаться и персистировать только в цилиндрическом эпителии). Цитологический метод заключается в обнаружении цитоплазматических включений хламидий в эпителиальных клетках препаратов. При окраске по Романовскому-Гимзе цитоплазматические включения видны как округлые или полулунной формы структуры красно-фиолетового (элементарные тельца) и сине-фиолетового (ретикулярные). Цвета при окраске раствором Люголя видны включения красно-коричневого цвета в виде гранулярных масс в клетках, окрашенных в желтый цвет.
Достоинства метода:
- Технически прост.
- На просмотр уходит 30-40 мин.
Недостатки и ограничения:
- Низкая чувствительность.
- Метод требует специального оснащения и соответствующей квалификации персонала.
- Могут возникнуть проблемы при взятии материала.
- Субъективность оценки результатов.
- Возможность обнаружения псевдовключений (клеточных структур и бактерий), напоминающих включения хламидий.
Иммуноцитологический метод
Это один из самых распространенных способов диагностики хламидийной инфекции. Метод иммунофлюоресценции основан на окрашивании мазков биологического материала моноклональными антителами, которые либо непосредственно конъюгированы с флюоресцентным красителем (прямой метод), либо выявляются в мазке вторичными флюоресцин-меченными антителами (непрямой метод). Мазки исследуют под люминесцентным микроскопом, время одного анализа составляет 30-60 мин.
Прямая иммунофлюоресценция
ПИФ - это прямое выявление антигенов хламидий. При люминесцентной микроскопии хламидийные включения определяются в виде образований в клетке эпителия с зеленой или желто-зеленой флюоресценцией на коричнево-оранжевом фоне цитоплазмы клеток.
Положительный контроль должен иметь не менее 10 элементарных телец, расположенных внеклеточно и имеющих характерную флюоресценцию.
Достоинства метода:
- Высокая чувствительность (90-95%) и специфичность (до 98%) (Гранитов В.И., 1999).
- Быстрое выявление хламидий.
- Возможность определения возбудителя в небольшом количестве материала.
Недостатки и ограничения:
- Метод требует специального оснащения и соответствующей квалификации персонала.
- Могут возникнуть трудности при взятии материала.
- Субъективность оценки результатов.
Определение бактериальных антигенов (иммуноферментный анализ)
В основе этого метода лежит реакция связывания антител со специфическими полисахаридами или белками возбудителями (антигенами). Количественная оценка связывания антител с антигеном возбудителя проводится по степени выраженности цветной реакции. Время выполнение теста - 4-6 часов.
Преимущества метода:
- Возможность определения не только самих микроорганизмов, но и их растворимых антигенов, которые накапливаются в жидкостях инфицированного организма.
- Автоматизация и высокая пропускная способность.
Методы экспресс-диагностики
Основой экспресс-диагностики хламидийной инфекции является иммунохроматография и ферментоспецифическая реакция. Использование наборов различных фирм для экспресс-диагностики хламидийной инфекции позволяет визуально оценивать результаты через 10-15 мин. Чувствительность методов составляет 50-60%. Эти наборы могут быть использованы для скрининговых исследований.
Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР-диагностика)
Эта реакция является методом прямого определения специфической последовательности родительской ДНК для копирования (амплификации) с помощью двух коротких фрагментов ДНК (праймеров), которые комплементарны концевым участкам этой последовательности. Затем происходит удлинение последовательности ДНК за счет имеющихся в реакционной смеси в избытке дезоксинуклеозидтрифосфатов. В результате этого процесса происходит образование ампликонов копии обнаруженной последовательности ДНК. Ампликоны выявляют посредством электрофореза в агарозе. Наличие специфического фрагмента ДНК определяют с помощью контрольной ДНК исследуемого возбудителя, амплифицированной одновременно с клиническими образцами.
Достоинства метода:
- Уникальная видовая специфичность и чувствительность (до 10 молекул ДНК).
Недостатки и ограничения:
- Высокая стоимость.
- Метод требует специального оснащения и соответствующей квалификации персонала.
- Большой риск загрязнения образцов продуктами амплификации при несоблюдении протокола исследования.
=================
Вы читаете тему:
Современный алгоритм диагностики хламидийной инфекции
1. Chlamydia trachomatis и ее роль в заболеваниях урогенитального тракта.
2. Методы прямого выявления Chlamydia trachomatis.
3. Методы непрямого выявления Chlamydia trachomatis.
Смирнова Т. А., Покатович O. K. БГМУ.
Опубликовано: "Медицинская панорама" № 8, сентябрь 2004.